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INTRODUCCIÓN

Citometría de flujo es una tecnología en la cual se miden simultáneamente múltiples parámetros de una célula o partícula (previamente marcadas con fluorocromos) en suspensión dentro de una población heterogénea. Para ello hacemos pasar dichas células, a velocidad cgráficasonstante de varios miles por segundo y dentro de un flujo laminar, a través de un cámara de flujo sobre la que incide un haz de luz coherente  a una longitud de onda específica “Láser”. Como consecuencia del impacto, se produce una dispersión de luz policromática generada por los diferentes fluorocromos que es captada por diversos detectores de gran sensibilidad. Los datos generados se analizan estadísticamente mediante varios softwares específicos que nos dan una gran información acerca de sus características intrínsecas y / o extrínsecas así como estructurales y / o funcionales de las células. La citometría de flujo se utiliza en muy diversas aplicaciones, que van desde inmunofenotipado, muerte celular, análisis de ploidías, contaje celular, expresión de genes reporteros, etc
La importancia del análisis por citometría de flujo, es que las medidas se hacen individualmente sobre cada partícula de la suspensión, y no como valor medio de la población total.
Las ventajas que proporciona la citometría de flujo frente a otros métodos que emplean fluorocromos son la objetividad, elevada sensibilidad y velocidad de análisis, posibilidad de realizar mediciones simultáneas y separación celular en los Sorter. Las desventajas son los costes de instrumentación y la incapacidad de visualizar las células que estamos analizando.

Cell Sorting

La separación celular por citometría de flujo o “Cell Sorting” es el proceso de separación física de partículas en base a la expresión diferencial de uno o varios parámetros analizables por técnicas de citometría de flujo analítica. sorterLas separaciones de células o poblaciones celulares homogéneas se realizan con objeto de llevar a cabo posteriormente ensayos bioquímicos, moleculares o de diferenciación celular de poblaciones de interés, y requieren de la utilización de sofisticados aparatos de citometría de flujo, denominados “Cell Sorters”. Existen varios modos de “sorting” que se ajustan en función de cuales sean los requisitos de cada separación. Los distintos ajustes permiten, por ejemplo, optimizar la pureza de la población separada, optimizar la recuperación celular de la población separada o separar números exactos de células en placas multipocillo.
Tienen menor potencia que las técnicas de separación masiva (centrifugación, etc...), pero permiten separaciones que estas técnicas no consiguen. . Actualmente  se puede hacer separación inmunomagnética para las cuales hay diferentes casas comerciales que tienen gran variedad de reactivos y aparatos.

Los Sorters se caracterizan por:
5.1.- Recuperación (recovery): porcentaje de partículas sorteadas recogidas en el colector, del total de partículas activadas por el Sorter.
5.2.- Pureza (purity): porcentaje de partículas sorteadas recogidas que cumplen los criterios seleccionados, en función del total sorteado.
5.3.- Rendimiento: porcentaje de partículas recogidas que cumplen los criterios seleccionados, en función de las partículas teóricas que los cumplirían.