RESUMEN DE INVESTIGACIÓN

Las quimioquinas son citocinas quimiotácticas, que actúan a través de receptores atados a la membrana plasmática. Las quimioquinas están involucrados en funciones celulares como la regulación de la defensa inmune, el crecimiento tumoral, la aterosclerosis así como el asma. La migración de las células inmunes de la sangre hacia los tejidos es crucial para la vigilancia inmunológica y la defensa del huésped. Nuestro grupo utiliza técnicas de biología celular y modelos animales knock-out para estudiar la respuesta de las quimioquinas en células monocíticas.

La migración de las células es una función biológica compleja regulada por las integrinas, factores de crecimiento y quimioquinas. Para valorar la importancia del tráfico de membrana que ocurre durante la migración celular hacia un gradiente de quimioquinas, analizamos el número de receptores de quimioquinas CCR2. Las células que no migran internalizan el CCR2 a un dosis de ligando CCL2 mas alta. Estas observaciones muestran que la internalización se produce durante la quimiotaxis y sugieren que la eficiencia de la internalización del CCR2 se reduce en las células que no migran.

La clatrina como la dinamina son dos proteínas implicadas en la transferencia de material entre los orgánulos celulares. Manipulando los niveles de clatrina y dinamina seguimos las consecuencias de las modificaciones de la endocitosis sobre los mecanismos implicados en la migración celular estimulada por CCL2. Tratamiento de las células con sacarosa interfiere con la endocitosis mediada por clatrina. La sacarosa altera la internalización de CCR2 y la migración de los monocitos. Cuando la clatrina se interfiere con ARN interferentes, CCR2 y la absorción de la transferrina asi como la migración celular se impidieron. Dinamina es una proteína endocítica implicada en la escisión de vesículas. Esta función se puede manipular con la ayuda de un inhibidor: el dynasore. Cuando las células fueron tratadas con dynasore, la migración celular se redujo. Nuestros hallazgos indican que si impides el trafico de membrana la migración de las células es deficiente. La relevancia del tráfico de membrana en el proceso de migración de las células requiere una evaluación adicional con ensayo de la herida y modelos y técnicas de imagen in vivo.

También se encontró que el receptor nuclear RXR (receptor retinoide X) regula la trascripción de las quimioquinas CCL6 y CCL9 in vivo e in vitro. Los ratones que carecían RXR en los macrófagos mostraron menores niveles de CCL6 y CCL9 en sangre. Cuando estos ratones sufrían de peritonitis, tenían menos inflamación y menos leucocitos fueron atraídos. También eran menos propensos a la sepsis. Nuestros resultados sugieren RXR como diana para el tratamiento de procesos inflamatorios con fármacos.

En un estudio en colaboración, hemos ideado un método que asigna la topología de proteínas de membrana con proteínas fluorescentes (FP). Este ensayo de cambio de pH (PEA) se aprovecha de la sensibilidad al pH de la GFP y YFP. Las principales ventajas de la PEA son su simplicidad técnica. Además se puede aplicar a células vivas y permite la cuantificación de la proporción de dentro / fuera de las membranas de proteínas con múltiples topologías. Creemos que este ensayo será de interés para grupos de trabajo con las proteínas de membrana.