RESUMEN DE INVESTIGACIÓN

Nuestra investigación tiene como objetivo explorar la especialización funcional de las células dendríticas derivadas de monocitos durante respuestas inflamatorias causadas por infecciones por bacterias (Listeria monocytogenes), levaduras (Candida albicans) y parásitos (Leishmania major) o por reacciones alérgicas inducidas por alergenos de plantas (Ole e 1), hongos (Asp f 1) y ácaros (Der p 1/2), utilizando modelos experimentales en ratón.

En particular nuestras líneas de investigación actuales están centradas en los siguientes puntos:

• Análisis de las funciones efectoras de los monocitos en inmunidad innata y adaptativa.

• Análisis de las propiedades migratorias de macrófagos y células dendríticas derivadas de monocitos.

• Regulación de la diferenciación de monocitos en células dendríticas o macrófagos in vivo durante la respuesta inmune contra Leishmania major.

• Especialización funcional de las células dendríticas para la inducción de respuestas Th2 contra patógenos y alergenos.

• Análisis del perfil de expresión génica de monocitos y células dendríticas derivadas de monocitos expuestos a alergenos y a mediadores polarizadores de respuestas Th2.

• Efecto del tratamiento con estatinas sobre la producción de citoquinas y el metabolismo del óxido nítrico por células dendríticas derivadas de monocitos activadas in vitro por ligandos de receptores TLR, o infectadas por Listeria monocytogenes.

• Análisis de la respuesta inmune innata in vivo frente a Listeria monocytogenes en ratones tratados con estatinas.

• Papel del interferón de tipo I en la respuesta inmune Th17 frente a Candida albicans.

La metodología diseñada para abordar estos objetivos se basa en las siguientes estategias experimentales:

• Desarrollo de modelos de infección in vivo utilizando distintas cepas de ratón, incluyendo ratones deficientes en citoquinas (GM-CSF), en receptores de citoquinas /quimioquinas (IFNAR, CCR2, CCR7), o moléculas implicadas en la activación de las células dendríticas (MyD88, NOD 1/2, IRF-3, PPAR-gamma) así como ratones transgénicos para receptores TCRs que reconocen péptidos derivados de la ovalbúmina expresados en el contexto de MHC I (OT-I) o MHC II (OT-II, DO.11).

• Técnicas de biología celular diseñadas para la purificación o aislamiento de poblaciones celulares a partir de médula ósea, piel, ganglios linfáticos y bazo, mediante técnicas de separación inmunomagnéticas y de citometría de flujo.

• Análisis de monocitos, células dendríticas y macrófagos en suspensiones celulares o secciones de tejidos de ratones infectados con Leishmania o Listeria, mediante microscopía electrónica o microscopía confocal tras marcaje por inmunofluorescencia.

• Diferenciación in vitro de células dendríticas y macrófagos a partir de cultivos de monocitos o precursores de médula ósea, suplementados con GM-CSF, IL-3, M-CSF o Flt3L.

• Análisis de perfiles de expresión génica a nivel de proteína mediante citometría de flujo, ELISA y electroforesis.

• Análisis de perfiles de expresión génica a nivel de mRNA mediante PCR cuantitativa a tiempo real, análisis por microarrays del genoma completo e inmunoprecipitación de cromatina .