RESUMEN DE INVESTIGACIÓN

Análisis de la biología de Salmonella en un estado de no proliferación en el interior de la célula eucariótica

Dentro de nuestro objetivo de determinar los mecanismos por los cuáles el patógeno intracelular bacteriano Salmonella controla la velocidad de crecimiento tras la invasión de células eucarióticas, estamos realizando estudios dirigidos a analizar la expresión de pequeños RNA reguladores (sRNAs) en esta bacteria.

Los datos obtenidos hasta el momento indican que la expresión de algunos sRNA cambia en fases tempranas de la infección mientras que otros sólo responden en fases tardías cuando el patógeno permanece en estado no proliferativo. Este segundo grupo de sRNAs son de interés añadido dado que podrían relacionarse con el proceso de adaptación del patógeno a limitación de nutrientes u otros tipos de estrés y que podría permitirle una estancia prolongada en la célula infectada. Hemos identificado también un nuevo sRNA codificado en el plásmido de virulencia pSLT. Este sRNA se expresa a altos niveles en bacteria intracelular que se encuentra en estado de no crecimiento. Estamos desarrollando estudios encaminados a identificar los posibles blancos de este nuevo sRNA así como los mecanismos por los que podría ejercer su acción reguladora.

Otro punto de interés es el entendimiento de los mecanismos que emplea Salmonella para invadir fibroblastos, el tipo celular en el que programa un estado de persistencia. Los datos obtenidos con distintas líneas celulares apoyan un modelo de variadas rutas de invasión que podrían ser utilizadas indistintamente. Como característica, estas rutas de entrada difieren sustancialmente a lo descrito en células epiteliales. Un ejemplo es la aparente dispensabilidad de la GTPase RhoG para que la bacteria reorganice la actina de la célula que infecta y promover así su internalización .

Proteínas de superficie de Listeria monocytogenes ancladas a la pared celular y su papel en virulencia

Aunque abundantes en bacterias del género Listeria, la función de proteínas de superficie que contienen un motivo LPXTG en su extremo C-terminal promoviendo su anclaje covalente a peptidoglicano es conocida sólo en un número escaso de las mismas. Para obtener información adicional, estamos realizando estudios de proteómica encaminados a la identificación de estas proteínas en distintas condiciones de crecimiento.

Por vez primera, estamos además obteniendo cantidad suficiente de bacteria intracelular para identificar proteínas de pared de la familia LPXTG del patógeno L. monocytogenes y conocer cuáles de ellas están sometidas a regulación en el interior de la célula eucariótica.

En colaboración con otros laboratorios europeos, estamos analizando la función de estas proteínas mediante análisis fenotípico de mutantes carentes en cada una de la 41 proteínas LPXTG codificadas en el genoma de la estirpe EGD-e. Los análisis del proteoma de pared en cada uno de estos mutantes están revelando una posible conexión funcional entre dos proteínas de esta familia y la actividad del regulón de respuesta a estrés dirigido por el factor sigma alternativo SigB. Estas observaciones conectarían por vez primera la integridad de la pared celular con este factor sigma alternativo.